分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其机制

摘要

目的:探讨分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其在被吞噬了结核菌的巨噬细胞吞噬后分布于结核菌内外的滴度变化,为探讨D29用于治疗结核病的机制及临床治疗剂量的确定提供参考.方法:将体外培养的巨噬细胞在加入D29不同时间后裂解,测定D29滴度,同时在加入D29 12 h后收集细胞上清液,ELISA法检测一氧化氮(NO)和白细胞介素12(IL-12)水平；将D29加入到已吞噬结核菌的巨噬细胞中,于不同时间采用荧光定量PCR测定D29在结核菌内外分布的滴度.结果:1×108噬菌斑形成单位(PFU) D29加入巨噬细胞后,20 min时有2.5×104 PFU被巨噬细胞吞噬,180 min后D29大量失活,190min时巨噬细胞内已无存活的D29；细胞上清液中NO和IL-12水平与巨噬细胞空白组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但明显少于LPS阳性对照组(P＜0.05)；D29与吞噬了结核菌的巨噬细胞作用30 min时,即有D29进入结核菌内,作用40和50 min时,D29在结核菌内外滴度均有一过性升高,此后结核菌内外滴度均下降；作用190和210 min时D29量大幅度减少,48 h后几乎不能检测到D29.结论:D29被巨噬细胞吞噬后会失活,并且不影响巨噬细胞的免疫功能；D29能够进入被巨噬细胞吞噬的结核菌中,开始时随着时间延长结核菌中的D29数量增多；随后D29数量大量减少,最后消失.