分枝杆菌噬菌体

摘要： Tuberculosis (TB) is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis infection.There are a lot of clinical anti-TB drags applied.But the emergence of drag-resistant TB makes the new treatment methods,such as Mycobacteriophage therapy,is getting more and more attention.Mycobacterium tuberculosis phage is a kind of DNA virus,it can start the dissolution process of the bacterial cell wall,cracking Mycobacterium,and ultimately destroy the host bacteria,achieve the therapeutic effect.Mycobacterium tuberculosis phage terminase specifically cleaves DNA concatemer in DNA packaging process,and participate in the genomic packaging by producing mature virus DNA.The research of terminal enzyme will help us to further explore the molecular mechanism of phage therapy.In this experiment,using the large subunit TerL of Mycobacteriophages terminase in the genome of phage SWU1 as a template to construct a recombinant vector,heterologous expression in Escherichia coli,Then TerL heterologously expressed in E.coli.The highly purified TerL protein was obtained by a series of purification methods.Through the screening of crystallization conditions,the crystal of TerL was obtained,which laid the foundation for the structure and function analysis of TerL.%结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病,临床应用的抗结核药物有很多,但耐药性结核菌的出现使得新的治疗方法,如噬菌体疗法越来越受重视.结核菌噬菌体是一种DNA病毒,它能够启动细菌细胞壁的溶解过程,裂解分枝杆菌,从而最终摧毁宿主菌,达到治疗效果.结核菌噬菌体末端酶在DNA包装过程中特异性地切割DNA连环体,通过产生成熟的病毒DNA而参与基因组包装,对末端酶的研究有助于对噬菌体疗法的分子机制进行进一步的探索.以噬菌体SWU1基因组中末端酶的大亚基的基因TerL为模板,构建了重组载体,再经过在大肠杆菌中异源表达,获得目的蛋白后,利用一系列的纯化手段,得到了大量表达的高纯度的TerL蛋白,并通过结晶条件的尝试,得到了其晶体,为末端酶TerL结构的解析和功能的分析奠定了基础.

摘要： 目的 利用噬菌体生物扩增法(PhaB)分析人类免疫缺陷病毒(HIV)合并结核病(TB)双重感染患者的结核分枝杆菌的耐药状况,优化防治对策.方法 运用PhaB法对重庆市第九人民医院收治的112例HIV/TB双重感染患者(HIV/TB组)做TB菌的药敏检测,并与208例单纯肺结核患者(单纯TB组)的药敏检测做对比分析.结果 HIV/TB组的抗TB药耐药率要比单纯TB组低,HIV/TB双重感染患者5种常见抗TB药物的耐药率分别为异烟肼(INH) 7.14％、吡嗪酰胺(PZA) 7.14％、利福平(RFP) 5.36％、链霉素(SM) 5.36％、乙胺丁醇(EMB)4.46％,与单纯TB组患者比较(RFP 17.31％、INH 13.46％、PZA11.54％、EMB 10.58％、SM 9.62％),HIV/TB组RFP的耐药率低于单纯TB组,差异有统计学意义(P＜0.05),其他4种抗TB药耐药率与单纯TB组比较差异无统计学意义(P＞0.05),与绝对浓度法结果符合率分别为INH 96.4％、RFP 98.2％、PZA 96.4％、EMB 93.8％和SM 96.4％.结论 本地区HIV/TB双重感染患者结核分枝杆菌对RFP耐药率较普通肺结核患者低,与该类患者良好的服药依从性相关.PhaB测定所需时间短,操作简便,不需特殊仪器设备,可作为结核分枝杆菌耐药性的快速筛选方法.%Objective To analyze the drug resistance status of mycobacterium tuberculosis in patients with double immunization of human immunodeficiency virus (HIV) and tuberculosis (TB) by phage bioassay (PhaB),and to optimize the control strategy.Methods One hundred and twelve cases of HIV/TB infected patients.in Chongqing Ninth People's Hospital were treated with PhaB method,and the drug susceptibility testing results were compared with 208 cases of simple pulmonary tuberculosis patients.Results The anti-tuberculosis drug resistance rate of HIV/TB patients was lower than that of simple pulmonary tuberculosis patients.The resistance rates of 5 common anti-tuberculosis drugs in HIV/TB patients were 7.14％ of isoniazid (INH),7.14％ of pyrazinamide (PZA),5.36 ％ of rifampicin(RFP) streptomycin(SM),and 4.46 ％ of ethambutol (EMB),compared with simple pulmonary tuberculosis(resistance rates of RFP were 17.31％,IN H 13.46 ％,PZA 11.54 ％,EMB 10.58 ％,SM 9.62 ％),RFP resistance rate of HIV/TB infected patients was lower(P＜0.05).There was no significant difference between two groups in the other four anti-tuberculosis drug(P＞0.05).The coincidence rate with the absolute concentration method were INH 96.4％,RFP 98.2％,PZA 96.4％,EMB 93.8％ and SM 96.4％,respectively.Conclusion The resistance rate of mycobacterium tuberculosis to RFP in patients with HIV/TB infection in this region is lower than that in patients with common pulmonary tuberculosis,which is related to the good medication compliance of these patients.PhaB has the characteristic of fast,simple,without special equipment,it can be used as a rapid screening of mycobacterium tuberculosis drug resistance method.

摘要： 目的 探讨高强度荧光分枝杆菌噬菌体Φ2 GFP10检测MTB对抗结核药物耐药性的价值.方法 选取北京胸科医院2014年4-6月疑诊耐药结核病患者的MTB临床分离株128株,用Φ2GFP10噬菌体法测定其对异烟肼、利福平和链霉素的敏感度,并以罗氏药敏试验结果为对照评价其诊断价值.采用SPSS 17.0软件绘制荧光酶标仪法的受试者工作曲线,并确定临界值.结果 Φ2 GFP10荧光噬菌体法检测异烟肼、利福平和链霉素的敏感度分别为100.0％(62/62)、98.1％ (53/54)和92.6％ (50/54),特异度分别为84.8％ (56/66)、91.9％(68/74)和91.9％(68/74).噬菌体法和传统检测方法对异烟肼、利福平和链霉素耐药性检测的一致性分别为0.92、0.95和0.92.噬菌体法检测利福平和链霉素的耐药性2d即可获得结果,而异烟肼为3d.结论 Φ2 GFP10噬菌体法检测利福平、异烟肼和链霉素耐药的敏感度和特异度较高,且耗时短、成本低,有望成为一种快速、简便、经济的耐药结核病筛选方法.%Objective To evaluate the high-intensity green fluorescent protein fluorophage Φ2GFP10 method for drug susceptibility testing of tuberculosis for isoniazid (INH),rifampin (RIF),and streptomycin (SM).Methods A total of 128 clinical M.tuberculosis strains were isolated from patients with suspected drug-resistant tuberculosis visiting Beijing Chest Hospital (Beijing,China) from April to June 2014.All of the isolates were tested by the phage assay,while conventional drug susceptibility tests were performing on Lwenstein-Jensen culture medium as reference.Results The sensitivities of Φ2GFP10 assay for INH,RIF,and SM resistance detection were 100.0％,98.1％ (53/54),and 92.6％ (50/54),respectively,while their specificities were 84.8％ (56/66),91.9％ (68/74),and 91.9％ (68/74),respectively.The agreement between the phage assay and the conventional assay for detecting INH,RIF,and SM resistance was 0.92,0.95 and 0.92,respectively.The Φ2 GFP10-phage assay could be done within 2 days for RIF and SM,and 3 days for INH.Conclusions The Φ2GFP10-phage method for drug susceptibility test is very sensitive and specific.The method has the potential to be a valuable,rapid and economical screening method for detecting drug-resistant tuberculosis.

摘要： Mycobacteriophages are powerful tools for investigating and manipulating their mycobacterial hosts.More than 1,000 mycobacteriophages have been genetically sequenced and the amazing genetic diversity of mycobacteriophages is emerging as a surprise.Mycobacteriophages have excellent application prospects in the anti-tuberculosis active polypeptides and clinical diagnosis of tuberculosis.Mycobacteriophages are encoded with endolysin,which was expressed by the phage at the end phase of infecting the hosts and can hydrolyze the cell wall structures to release the progeny phage.In addition to endolysin,mycobacteriophages also encode other polypeptides and proteins with anti-tuberculosis activitites.The difficulty of diagnosing active tuberculosis and the lack of rapid drug susceptibility testing (DST) at the point of care remain critical obstacles to the control of tuberculosis.Moreover,mycobacteriophages also play a significant role as a rapid and inexpensive point-of-care diagnostic tool and as a tool for DST of M.tuberculosis in clinical sputum samples.In this paper,the anti-tuberculosis activity and its mechanism of peptides derived from mycobacteriophages were reviewed.We also described the applications of mycobacteriophage for the detection of drug resistant tuberculosis and the prospects of the applications of engineering phages against drug resistant pathogens.%分子杆菌噬菌体是其宿主分枝杆菌的病毒,前者对于结核病控制及临床结核菌诊断有良好的应用前景.目前已有超过1000株分枝杆菌噬菌体进行了全基因组测序,结果显示分枝杆菌噬菌体基因组具有丰富的多样性和镶嵌结构,且都编码有噬菌体裂解酶.裂解酶是噬菌体在感染宿主末期表达的蛋白,其能水解细胞壁以释放子代噬菌体.除裂解酶外,分枝杆菌噬菌体还编码其它有抗结核活性的多肽及蛋白.分枝杆菌噬菌体在临床耐药结核菌的检测中也发挥了巨大作用.本文综述了来源于分枝杆菌噬菌体的多肽与蛋白的抗结核活性,并系统阐述了分枝杆菌噬菌体在临床结核菌耐药性检测中的应用,并展望了工程噬菌体在杀死耐药病原菌研究中的应用前景.

摘要： 目的·构建分枝杆菌噬菌体(TM4)与复苏促进因子(Rpf)的重组体(TM4-RpfE),为联合抗结核药物实现杀灭结核休眠菌、缩短结核化疗疗程奠定实验基础.方法·电转化法将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,制备重组工程菌;提取TM4基因组DNA;重叠PCR扩增目的融合基因hsp60-RpfE,多步重叠PCR扩增插入长片段HHRH (homologous+ hsp60-RpfE+ homologous);电转化法将噬菌体DNA与插入长片段HHR共同转入重组工程菌,挑取单噬菌斑进行PCR和测序验证;SDS-PAGE分析重组噬菌体的蛋白表达.结果·重叠PCR扩增出全长901 bp大小的目的融合基因hsp60-RpfE和1 873bp大小的插入长片段HHRH;PCR验证重组后的噬菌斑,分别在955bp和301 bp处出现特异性条带;SDS-PAGE分析显示重组型噬菌体在21 000处出现特异性蛋白条带.结论·分枝杆菌噬菌体重组体TM4-RpfE构建成功,初步验证目的基因RpfE得到表达.%Objective·To construct recombinant mycobacteriophage TM4-RpfE to lay a foundation for experimental research about how to eradicate Mycobacterium tuberculosis in combination with anti-tuberculosis drugs,and how to shorten treatment for tuberculosis ultimately.Methods·Electrotransformation was used to introduce pJV53 plasmid into Mycobacterium smegmatis to prepare recombinant engineering bacteria.After amplification of hsp60-RpfE fusion gene by overlap PCR,a long gene fragment (homologous +hsp60-RpfE+homologous,HHRH) was amplified by multi-step overlap PCR.The DNA of mycobaeteriophage TM4 and HHRH fragment were cotransfected into the recombinant engineering bacteria by electrotransformation,then the recombinant phage from the single primary plaques were confirmed by PCR and sequencing.SDS-PAGE was used to analyze the protein expression in recombinant phage.Results·The hsp60-RpfE fusion gene at the length of 901 bp and HHRH fragment at the length of 1 873 bp were identified by overlap PCR.The PCR product produced 955 bp and 301 bp DNA bands in the first generation plaques colony.SDS-PAGE analysis showed a specific protein band at 21 000 in the recombinant phages.Conclusion·The recombinant mycobacterium phage TM4-RpfE was successfully constructed and the expression of target gene RpfE was initially verified.

摘要： 目的探讨高强度荧光分枝杆菌噬菌体Ф2GFP10检测MTB对抗结核药物耐药性的价值。方法选取北京胸科医院2014年4-6月疑诊耐药结核病患者的MTB临床分离株128株，用Ф2GFP10噬菌体法测定其对异烟肼、利福平和链霉素的敏感度，并以罗氏药敏试验结果为对照评价其诊断价值。采用SPSS17．0软件绘制荧光酶标仪法的受试者工作曲线，并确定临界值。结果Ф2GFP10荧光噬菌体法检测异烟肼、利福平和链霉素的敏感度分别为100．0％（62／62）、98．1％（53／54）和92．6％（50／54），特异度分别为84．8％（56／66）、91．9％（68／74）和91．9％（68／74）。噬菌体法和传统检测方法对异烟肼、利福平和链霉素耐药性检测的一致性分别为0．92、0．95和0．92。噬菌体法检测利福平和链霉素的耐药性2d即可获得结果，而异烟肼为3d。结论Ф2GFP10噬菌体法检测利福平、异烟肼和链霉素耐药的敏感度和特异度较高，且耗时短、成本低，有望成为一种快速、简便、经济的耐药结核病筛选方法。

摘要： 目的：评价痰噬菌体生物扩增法（PhaB ）与胶体金法联合检测在肺结核诊断中的临床价值。方法对临床确诊的364例肺结核患者和67例其他呼吸系统疾病患者分别采用痰 PhaB 法和胶体金法进行检测，比较痰PhaB 法、胶体金法单独及联合检测诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果痰 PhaB 法与胶体金法联合检测的敏感度[82．14％（299／364）]高于痰 PhaB 法、胶体金法单独检测，但特异度[86．57％（58／67）]却有所下降。联合检测对涂片阳性肺结核患者的检出率为99．07％（107／108），明显高于胶体金法72．22％（78／108），差异有统计学意义（χ2＝31．675，P＜0．001）；联合检测对涂片阴性肺结核患者的检出率为75．00％（192／256），明显高于痰 PhaB 法54．69％（140／256）、胶体金法60．16％（154／256），差异均有统计学意义（χ2＝23．167，P＜0．001；χ2＝12．872，P＜0．001）。结论痰 PhaB 法对肺结核诊断提供新的检测途径，其与胶体金法联合检测更利于肺结核尤其是涂片阴性肺结核的准确诊断。

摘要： 为了研究分枝杆菌噬菌体裂解酶lysA的生物学特性及对宿主菌的作用,对分枝杆菌肌尾噬菌体CJAUS5的lysA基因进行PCR扩增、克隆和原核表达,并利用生物信息软件对其序列进行分析.结果显示,CJAUS5-lysA基因与GenBank中分枝杆菌肌尾噬菌体的lysA基因具有高度同源性;克隆基因在大肠杆菌BL21中获得了成功表达,重组蛋白以包涵体的形式存在,蛋白分子量约为52 kDa;lysA蛋白保守区域分析结果显示,lysA包含具有酰胺酶活性的肽聚糖识别蛋白(PGRP)超家族,表明LysA可能具有裂解肽聚糖的能力.本研究克隆表达出分枝杆菌噬菌体CJAUS5裂解酶LysA,为进一步研究其相关功能奠定了基础.

摘要： 综合多学科技术手段研究生物体系复杂问题,是目前生物医学研究的显著特征之一,这为本科生教学改革提出了新的更高的要求.噬菌体是开展生命科学研究型教学改革的理想生物材料.文章借鉴美国匹斯堡大学牵头的美国大学生物学教学改革项目“噬菌体猎人”的实践,总结了本课题组近5年来将分枝杆菌噬菌体科研成果转化为本科生命科学研究型教学的经验.

摘要： 目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中细胞因子分泌水平,RT-PCR和Western blot分别检测上皮细胞黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达水平。结果:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞一段时候后,细胞的生长形态、存活率、凋亡率、细胞因子分泌水平以及黏蛋白MUC5AC表达与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:分枝杆菌噬菌体Chy3无论高低滴度对体外培养人气道上皮细胞生长和功能均无明显影响,有较好的安全性。

摘要： 本文对分枝杆菌噬菌体SWU1的全基因进行了筛选.发现SWU1gene32的蛋白产物在大肠杆菌及耻垢分枝杆菌内都具有细菌毒性.生物信息学分析发现,SWU1gp32具有信号肽并定位在细胞膜上.故猜测gp32依靠信号肽运输到宿主菌细胞膜上,然后发挥作用.课题组正在通过蛋白的截短实验寻找SwU1 gp32具有宿主毒性的核心作用区域,并试图对其作用机理进行深入探讨.

摘要： 本文依靠分离出的新奇分枝杆菌噬菌体SWU1，试图开发出可以降解结核菌生物膜的新型药物。依靠比较基因组学方法，寻找到SWUl基因组内特异存在的gene59。研究发现这一基因编码的蛋白可降解耻垢分枝杆菌菌苔。对耻垢分支杆菌生物膜的降解作用进行分析。

摘要： 分枝杆菌噬菌体内含有大量的未知功能基因，对这些基因的功能研究开发有助于研发防控结核病的新措施。本研究分离了一株新的分枝杆菌噬菌体SWU1，发现它具有特殊的具晕环的噬菌斑形态及新奇的头尾相连的分枝丝状形态。对其进行了全基因组测序、功能预测，并进一步研究了部分基因的功能。实验结果显示，SWU1 gene32产物对大肠杆菌及耻垢分枝杆菌都有细胞毒性。对这一蛋白的功能机理进一步研究，有助于找出抗结核药物的新靶标。SWU1 gene59产物则可以影响耻垢分枝杆菌的菌苔及生物膜。通过该蛋白的研究，可能获得降解分枝杆菌生物膜的生物活性物质。

摘要： 结核病是当今全球范围对人类最具威胁性的感染性疾病之一,同时,也是一个严重的公共卫问题.结核病人的细菌学检查是发现传染源的主要途径和手段,是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据,也是考核疗效,评价治疗效果的可靠标准[1].目前常规细菌学检查方法均有不足之处,如涂片显微镜检查虽然快速、便宜,但敏感性低,需大量的人力,且不能区分活菌和死菌;结核分枝杆菌培养敏感性较高,但所需时间长,不利于指导临床用药.近几年,由于结核病诊断、治疗与预防领域存在着许多亟待解决的棘手问题,国内外研究者开始探索研究分枝杆菌噬菌体在结核病诊断、药敏试验及实验性治疗中的应用.

摘要： 建立牛分枝杆菌噬菌体快速检测技术，探讨最佳的检测条件，并将建立的方法用于牛分枝杆菌及20种常见分枝杆菌和6种非分枝杆菌的检测。结果表明，噬菌体工作浓度为1×108PRU/ml、37°C感染2h为最佳检测条件。杀毒剂浓度在100mmol/L，室温作用10min即可完全杀灭受试噬菌体。选择浓度为4mg/ml的对数生长期指示细菌为工作浓度，获得理想的检测结果。加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染。牛分枝杆菌和耻垢分枝杆菌检测结果为阳性，16种常见分枝杆菌和6种非分枝杆菌检测结果均为阴性，4种NTM(偶然、胞内、金色、草分枝杆菌)在高浓度时(>105条/ml)检测结果为阳性。该法可检测出60～120条/ml牛分枝杆菌。重复性试验表明，批内、批间变异系数均小于15%，重复性良好。该法检测牛分枝杆菌具有快速、经济、易操作等特点，但测定条件的选择非常重要。

摘要： 目的：探讨噬茵体生物扩增(PhaB)法快速检测脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值。rn 方法：选取2006年8月至2007年3月,通过病史、临床表现及影像学检查初步诊断的56例脊柱结核患者,以无菌原则收集术中病灶中的脓液,应用直接涂片法,BACTEC MGIT-960法及PhaB法分别检测56份脓液标本以及10株结核分枝杆菌标准株,15株非结核分枝杆菌及5株非分枝杆菌。rn 结果：PhaB法检测10株结核分支杆菌标准株均为阳性,15株非结核分支杆菌和5株非分支杆菌均为阴性。46份BACTEC MGIT-960培养阳性和10份BACTEC MGIT-960培养阴性的标本中,PhaB法分别有42份(91.3%)、3份(30.0%)阳性,检出率分别为82.1%和80.4%(P>0.05).涂片检查阳性仅13份(23.2%)。阴性43份(76.8%),而应用PhaB法可以检测出45份(80.4%)阳性,其中有33份为涂片阴性的标本(P<0.05)。用PhaB法能在18-24小时内观察结果,较BACTECMGIT-960法提前5-17天。rn 结论：PhaB法与直接涂片法、BACTECMGIT-960法相比,可以简便、快速地检测结核分支杆菌,全程只需1d,并且具有较高的敏感性和特异性,在脊柱结核的诊断和治疗中具有很好的应用价值。

摘要： 目的：探讨噬茵体生物扩增(PhaB)法快速检测脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值。rn 方法：选取2006年8月至2007年3月,通过病史、临床表现及影像学检查初步诊断的56例脊柱结核患者,以无菌原则收集术中病灶中的脓液,应用直接涂片法,BACTEC MGIT-960法及PhaB法分别检测56份脓液标本以及10株结核分枝杆菌标准株,15株非结核分枝杆菌及5株非分枝杆菌。rn 结果：PhaB法检测10株结核分支杆菌标准株均为阳性,15株非结核分支杆菌和5株非分支杆菌均为阴性。46份BACTEC MGIT-960培养阳性和10份BACTEC MGIT-960培养阴性的标本中,PhaB法分别有42份(91.3%)、3份(30.0%)阳性,检出率分别为82.1%和80.4%(P>0.05).涂片检查阳性仅13份(23.2%)。阴性43份(76.8%),而应用PhaB法可以检测出45份(80.4%)阳性,其中有33份为涂片阴性的标本(P<0.05)。用PhaB法能在18-24小时内观察结果,较BACTECMGIT-960法提前5-17天。rn 结论：PhaB法与直接涂片法、BACTECMGIT-960法相比,可以简便、快速地检测结核分支杆菌,全程只需1d,并且具有较高的敏感性和特异性,在脊柱结核的诊断和治疗中具有很好的应用价值。

摘要： 目的：探讨噬茵体生物扩增(PhaB)法快速检测脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值。rn 方法：选取2006年8月至2007年3月,通过病史、临床表现及影像学检查初步诊断的56例脊柱结核患者,以无菌原则收集术中病灶中的脓液,应用直接涂片法,BACTEC MGIT-960法及PhaB法分别检测56份脓液标本以及10株结核分枝杆菌标准株,15株非结核分枝杆菌及5株非分枝杆菌。rn 结果：PhaB法检测10株结核分支杆菌标准株均为阳性,15株非结核分支杆菌和5株非分支杆菌均为阴性。46份BACTEC MGIT-960培养阳性和10份BACTEC MGIT-960培养阴性的标本中,PhaB法分别有42份(91.3%)、3份(30.0%)阳性,检出率分别为82.1%和80.4%(P>0.05).涂片检查阳性仅13份(23.2%)。阴性43份(76.8%),而应用PhaB法可以检测出45份(80.4%)阳性,其中有33份为涂片阴性的标本(P<0.05)。用PhaB法能在18-24小时内观察结果,较BACTECMGIT-960法提前5-17天。rn 结论：PhaB法与直接涂片法、BACTECMGIT-960法相比,可以简便、快速地检测结核分支杆菌,全程只需1d,并且具有较高的敏感性和特异性,在脊柱结核的诊断和治疗中具有很好的应用价值。

摘要： 目的：探讨噬茵体生物扩增(PhaB)法快速检测脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值。rn 方法：选取2006年8月至2007年3月,通过病史、临床表现及影像学检查初步诊断的56例脊柱结核患者,以无菌原则收集术中病灶中的脓液,应用直接涂片法,BACTEC MGIT-960法及PhaB法分别检测56份脓液标本以及10株结核分枝杆菌标准株,15株非结核分枝杆菌及5株非分枝杆菌。rn 结果：PhaB法检测10株结核分支杆菌标准株均为阳性,15株非结核分支杆菌和5株非分支杆菌均为阴性。46份BACTEC MGIT-960培养阳性和10份BACTEC MGIT-960培养阴性的标本中,PhaB法分别有42份(91.3%)、3份(30.0%)阳性,检出率分别为82.1%和80.4%(P>0.05).涂片检查阳性仅13份(23.2%)。阴性43份(76.8%),而应用PhaB法可以检测出45份(80.4%)阳性,其中有33份为涂片阴性的标本(P<0.05)。用PhaB法能在18-24小时内观察结果,较BACTECMGIT-960法提前5-17天。rn 结论：PhaB法与直接涂片法、BACTECMGIT-960法相比,可以简便、快速地检测结核分支杆菌,全程只需1d,并且具有较高的敏感性和特异性,在脊柱结核的诊断和治疗中具有很好的应用价值。

摘要： 目的:探讨应用噬菌体生物扩增法(噬菌体法)和用TMA(转录酶主导基因)扩增法检测白带中的结核分枝杆菌在早期诊断女性生殖器结核的临床价值。方法：选择2005年1月～2008年3月间该院收治的86例病理确诊为女性生殖器结核的患者。所有病例在治疗前应用噬菌体法和TMA检测白带中的分枝杆菌，同时白带分别送检荧光定量聚合酶链反应(PCR)、涂片和培养检测分枝杆菌，对照检查结果。结果：98例患者中噬菌体法52例阳性，阳性率53.06%，特异性为100%；TMA法阳性50例，阳性率51.02%；PCR21例阳性，阳性率为21.42%；培养法5例阳性，阳性率5.1%；涂片法全部阴性。噬菌体法和TMA明显高于涂片和培养法。结论：噬菌体生物扩增法和TMA在诊断女性生殖器结核中具有较高的敏感性和特异性，为早期诊断女性生殖器结核提供重要的临床价值。

摘要： 本发明公开了一个用于构建谷氨酸基因家族缺失结核分枝杆菌的重组TM4噬菌体文库及其应用。本发明首先提供了一个构建所述重组TM4噬菌体文库所需的重组穿梭载体文库，所述重组穿梭载体文库包括19个重组穿梭载体，分别插入了结核分枝杆菌谷氨酸家族19个成员基因两侧的同源臂序列。本发明构建的重组TM4噬菌体文库可以用于这些基因的敲除，验证这些基因是否是结核分枝杆菌的必需基因，用于构建基因突变替换菌株，用于构建基因敲除突变菌株，临床分离这些基因突变后对突变基因酶活性功能的研究，为结核分枝杆菌氨基酸代谢药物开发提供潜在靶点。

摘要： 本发明公开了一个用于构建NADH脱氢酶基因家族缺失结核分枝杆菌的重组TM4噬菌体文库及其应用。本发明首先提供了一个构建所述重组TM4噬菌体文库所需的重组穿梭载体文库，所述重组穿梭载体文库包括16个重组穿梭载体，分别插入了结核分枝杆菌NADH脱氢酶基因家族16个成员基因两侧的同源臂序列。本发明为了方便NADH脱氢酶基因功能研究及疫苗开发，构建了一个同源重组噬菌体文库，该文库可以用于结核分枝杆菌NADH脱氢酶基因敲除，验证基因是否必需基因，构建NADH脱氢酶敲除菌株，用于BCG疫苗优化改良。利用本发明所述噬菌体文库进行敲除时，敲除特异性好，阳性率高。

摘要： 本发明公开了一个用于构建谷氨酸基因家族缺失结核分枝杆菌的重组TM4噬菌体文库及其应用。本发明首先提供了一个构建所述重组TM4噬菌体文库所需的重组穿梭载体文库，所述重组穿梭载体文库包括19个重组穿梭载体，分别插入了结核分枝杆菌谷氨酸家族19个成员基因两侧的同源臂序列。本发明构建的重组TM4噬菌体文库可以用于这些基因的敲除，验证这些基因是否是结核分枝杆菌的必需基因，用于构建基因突变替换菌株，用于构建基因敲除突变菌株，临床分离这些基因突变后对突变基因酶活性功能的研究，为结核分枝杆菌氨基酸代谢药物开发提供潜在靶点。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及分枝杆菌噬菌体裂解酶Lysin‑Guo1的制备与应用。本发明提供一种分枝杆菌噬菌体裂解酶的制备与应用。本发明提供一种抑菌剂，其主要活性成分为分枝杆菌噬菌体裂解酶Lysin‑Guo1、含有Lysin‑Guo1表达元件的载体、含有Lysin‑Guo1表达元件的表达盒或含有Lysin‑Guo1表达元件的宿主细胞中的至少一种，Lysin‑Guo1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明还提供了分枝杆菌噬菌体裂解酶Lysin‑Guo1的制备方法。该裂解酶蛋白Lysin‑Guo1能够裂解多种结核分枝杆菌，还发现该裂解酶对其他细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌也具有一些抑制作用。本发明为耐药结核菌的抗痨替代疗法打下了基础。

摘要： 本发明涉及一种源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽，其疏水性氨基酸和亲水性氨基酸分别集中于两侧，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了上述源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在制备抗结核杆菌药物中的应用。本发明的衍生肽具有两亲性的α‑螺旋结构，抗结核杆菌效果明显，对其他正常的革兰氏阳性菌和阴性菌没有影响，在制备抗结核药物中具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种可投送自主发光元件的分枝杆菌噬菌体及其应用，该噬菌体中含有能够使宿主细菌自主发光所需基因

摘要： 本发明公开了氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的重组分枝杆菌噬菌体尾蛋白GP89，其能够特异性识别耻垢分枝杆菌，还公开了GP89‑eGFP融合蛋白以及GP89重组蛋白功能化磁性纳米颗粒，三者可用于制备耻垢分枝杆菌检测试剂；以GP89重组蛋白功能化磁性纳米颗粒作为耻垢分枝杆菌特异性捕获试剂、GP89‑eGFP融合蛋白作为荧光探针构建的耻垢分枝杆菌夹心荧光检测法，具有快速、方便、特异、灵敏、准确的优点，有望应用于分枝杆菌的现场检测和快速筛查，能够为临床诊断、食品安全和环境检测等领域检测分枝杆菌提供有力的技术支持。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及分枝杆菌噬菌体裂解酶Lysin‑Guo1的制备与应用。本发明提供一种分枝杆菌噬菌体裂解酶的制备与应用。本发明提供一种抑菌剂，其主要活性成分为分枝杆菌噬菌体裂解酶Lysin‑Guo1、含有Lysin‑Guo1表达元件的载体、含有Lysin‑Guo1表达元件的表达盒或含有Lysin‑Guo1表达元件的宿主细胞中的至少一种，Lysin‑Guo1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明还提供了分枝杆菌噬菌体裂解酶Lysin‑Guo1的制备方法。该裂解酶蛋白Lysin‑Guo1能够裂解多种结核分枝杆菌，还发现该裂解酶对其他细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌也具有一些抑制作用。本发明为耐药结核菌的抗痨替代疗法打下了基础。

摘要： 本发明涉及一种源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽，其疏水性氨基酸和亲水性氨基酸分别集中于两侧，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了上述源于分枝杆菌噬菌体多肽的衍生肽在制备抗结核杆菌药物中的应用。本发明的衍生肽具有两亲性的α‑螺旋结构，抗结核杆菌效果明显，对其他正常的革兰氏阳性菌和阴性菌没有影响，在制备抗结核药物中具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种可投送自主发光元件的分枝杆菌噬菌体及其应用，该噬菌体中含有能够使宿主细菌自主发光所需基因LuxCDABE，本发明构建的噬菌体噬粒的大小可达57kb以上，而现有λ噬菌体包装所能实现的最大载体不超过52kb。本发明噬菌体携带的自主发光元件存在于高效的转座子上，可以随着转座元件被高效地随机插入到宿主的基因组中，一方面可以破坏宿主的基因，另一方面，基因被破坏的宿主菌可以自主发光，便于利用自主发光这一特征高效地研究被破坏宿主基因的功能，可快速诊断样本中活的宿主菌以及快速检测宿主菌对药物的敏感性。这种诊断和检测比市面上最流行的BD MGIT 960系统要快8天左右的时间，而且更简便易行、直观且更经济。