枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶的克隆和表达

摘要

目的 :运用分子生物学手段获得葡萄糖脱氢酶基因 ,并表达该基因。方法 :根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因序列设计引物 ,通过PCR获得该基因并与源序列进行比较分析 ,与表达载体pET2 2b连接后转化至大肠杆菌JM 10 9(DE3)进行表达 ,并在全自动生化分析仪上用速率法测定其活性。结果 :克隆到的葡萄糖脱氢酶基因与源基因的同源性为 99% ,克隆到的GDH编码的氨基酸序列 16 7位左右存在突变 :EVI(GAAGTGATT )→AF(GCGTTT) ,利用酶的初提液测定的葡萄糖脱氢酶活力为 75U/L ,比活性为 10U/mg。 结论 :运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因 ,与表达载体连接后的重组体经大肠杆菌初步表达有活力 ,经诱导有望获得高产量的葡萄糖脱氢酶 ,从而为临床服务。