基于毛细管电泳的环介导恒温扩增技术检测方法研究

摘要

以大肠杆菌(E.coli)为对象,采用环介导恒温扩增技术(LAMP)对其扩增,在实验室自制的毛细管电泳-诱导荧光平台上建立了LAMP产物的检测新方法.引物F3,B3,FIP,BIP扩增的E.coli LAMP产物大小为240 bp.优化的毛细管电泳条件为:毛细管有效长度/总长度(10 cm/15 cm),筛分介质溶液为0.5％羟乙基纤维素(1 300 K),电场强度(100 V/cm),进样条件(100 V/cm,1.0s).毛细管电泳时,DNA长度在100～ 500 bp范围内与其迁移时间呈线性关系,相关系数为0.996.在相同毛细管电泳条件下对E.coli LAMP产物进行分析,并利用这种线性关系在电泳图中对E.coli LAMP产物与假阳性产物做区分,结果表明,毛细管电泳技术不仅可在15 min内实现LAMP产物及附加产物的快速检测,而且可快速区分LAMP阳性及假阳性实验产物.采用建立的毛细管电泳快速检测LAMP产物的方法,对AB0174 E.coli基因实施了LAMP,结果表明该方法适合DNA LAMP产物的快速检测.