农杆菌介导的遗传转化籼稻Kasalath的条件优化

摘要

Kasalath是目前用于水稻转基因研究的籼稻模式材料。运用组织培养和农杆菌介导的遗传转化技术,对水稻Kasalath愈伤组织诱导和遗传转化体系进行了优化。结果表明:以Kasalash的幼嫩种子或新鲜的成熟种子为外植体诱导愈伤组织的效果优于贮藏1年的种子;用0.5、1、1.5、2、2.5、3、10、20、30 mg/L的2,4–D诱导愈伤组织,以2.5 mg/L的2,4–D诱导效果最佳;用菌液OD600 nm为0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4的农杆菌Ag10和EHA105与愈伤组织共培养介导遗传转化,皆以OD600 nm为0.15的农杆菌溶液效果最好,且EHA105的介导效果比Ag10更佳,其抗性愈伤率可达82.0%;EHA105的介导(共培养)时间以3 d为宜;分化培养前对愈伤组织进行6～8 h快速干燥或48～72 h慢速干燥处理,可以明显提高愈伤组织的再生成苗率,并缩短分化时间;在对愈伤组织侵染处理前的预培养处理和对抗性愈伤进行分化培养前的预分化培养处理对Kasalath的遗传转化效率影响不大,可省略以缩短遗传转化时间。遵循以上优化条件,从愈伤组织诱导至遗传转化获得再生植株全过程的时间只需57～60 d(已报道的遗传转化全过程需70 d以上),遗传转化效率可达到已报道的最高值65%。