用DGGE法初步解析茯砖茶渥堆发酵过程中真菌群落的结构

摘要

为研究茯砖茶发花过程中真菌群落的结构和种类,对茯砖茶渥堆发酵过程中不同时间段黑毛茶样品中真菌群落的18S rDNA高变区进行扩增,对真菌18S rDNA变性梯度凝胶电脉（DGGE）图谱中的条带进行回收、克隆、测序和序列比对。结果表明：茯砖茶渥堆发酵过程中的真菌类型丰富,有好干性酵母（Wallemia sebi）、假丝酵母菌（Candida sp.）、热带假丝酵母（Candida tropicalis）、路德酵母（Lodderomyces sp.）、汉逊德巴利酵母（Debaryomyces hansenii）、毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、隐球酵母（Cryptococcus sp.）、牧草红酵母（Rhodotorula graminis）、阿姆斯特丹散囊菌（Eurotium amstelodami）、灰绿曲霉（Aspergillus glaucus）、米赫根毛霉（Rhizomucor miehei）、微小根毛霉（Rhizomucor pusillus）、白地霉（Galactomyces geotrichum）、安大略假单胞菌（Candida ontarioensis）、真皮毛孢子菌（Trichosporon dermatis）、斜卧青霉（Penicillium decumbens）、曲霉（Aspergillus penicillioides）等真菌存在;以渥堆24 h为分界点,真菌群落结构在分界点前后变化较大;真菌群落多样性指数在渥堆0~16 h呈升高趋势,〉16~24 h略有降低,〉24 h后继续升高,在渥堆后40 h上升到最高水平2.348,而渥堆〉40~48 h仍然维持在较高水平;在整个渥堆过程中,优势菌路德酵母、汉逊德巴利酵母和次优势菌阿姆斯特丹散囊菌均有出现,在渥堆后期出现了次优势菌好干性酵母、汉逊德巴利酵母和酿酒酵母;比对结果表明,渥堆过程中同时存在3株好干性酵母菌和7株阿姆斯特丹散囊菌,说明在渥堆发酵过程中优势菌种存在多样性。本研究结果表明,采用DGGE指纹图谱能全面、真实地反映茯砖茶渥堆发酵过程中真菌群落的结构和多样性变化。