库车小白杏果实苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及基本性质研究

摘要

苯丙氨酸解氨酶(PAL)是植物体内次级代谢的关键酶和限速酶,在果实机械损伤、组织褐变、抵抗逆境等方面具有重要的生理作用.采用冰浴研磨、硫酸铵分级沉淀、DE-52柱层析等方法,对库车小白杏果实中的苯丙氨酸解氨酶进行分离纯化,并对其酶学特性展开研究.结果表明:库车小白杏果实苯丙氨酸解氨酶纯化倍数为4.703,蛋白质得率为0.20％,酶得率为0.95％,纯化后的酶经SDS-PAGE凝胶电泳为单一蛋白带,酶亚基分子质量为51.4 kDa.PAL在硼酸缓冲液中最适pH=8.0、8.9,在Tris-HCl缓冲液中最适pH=8.9;PAL最适反应温度为40℃,对高温有一定的耐受性;最适底物浓度为0.02 mol/L,其米氏常数Km=1.326× 10-2 mol/L.