载体大小对木聚糖酶过量表达的影响

摘要

将黑曲霉Aspergillus niger木聚糖酶基因与表达载体pET21a(5 443 bp)和pET20b(3 716 bp)重组,而后转化E.coli BL21(DE3) 细胞,发现大载体细胞和小载体细胞中质粒DNA浓度为(4.6±0.01),(5.5±0.01)g·L-1,木聚糖酶含量为(57.2±10.6),(140.2±22.1) mg·L-1,木聚糖酶酶活性为(6.6±0.2),(69.6±11.2) U·mL-1.相对于大载体细胞,小载体细胞质粒浓度增加19.5%,木聚糖酶含量增加1.45倍,木聚糖酶活性增加9.5倍,说明载体大小对外源蛋白表达的影响效应呈递增趋势.由此可见,小型载体在表达外源蛋白时更利于减少宿主细胞的负担,利于质粒扩增并提高基因拷贝数,最后提高木聚糖酶含量及活性.