人β防御素3与植物巴西甜蛋白基因密码子的优化及其在毕氏酵母中的表达

摘要

根据人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlul-Brazzein的氨基酸序列,按照酵母密码子的偏爱性,合成了14段末端具有粘合位点的核苷酸序列,经连接、PCR扩增,使人β防御素3和植物甜蛋白des-pG lul-Brazzein的编码序列通过1段序列(含凝血酶切割位点)连接成为嵌合基因,将其插入到pPIC9K载体中,构建重组表达载体pPIC9K-hBD3-Bra.SalⅠ,BglⅡ单酶切后,分别电击转化到毕赤酵母GS115中,构建野生型和乙醇氧化酶缺陷型酵母工程菌株GS115-pPIC9K-hBD3-Bra.筛选鉴定后,以体积分数为0.5％的甲醇进行诱导,缺陷型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的90％,纯度较高,野生型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的57.8％.