牛结合珠蛋白α链单克隆抗体制备及辣根过氧化物酶标记

摘要

为了制备牛结合珠蛋白主要抗原区重组蛋白(pirBoHp)单克隆抗体及对其进行辣根过氧化物标记.试验利用纯化的pirBoHp作为免疫原,免疫雌性BALB/c小鼠,然后利用淋巴细胞杂交瘤技术,制备BoHp单克隆抗体.通过Western blot试验分析制备的BoHp单克隆抗体的免疫反应性;利用抗体亚型鉴定试剂盒,分析鉴定BoHp单克隆抗体的亚型和轻链型.利用改良过碘酸钠标记法,对制备的BoHp单克隆抗体进行辣根过氧化物酶(HRP)标记.结果显示,试验成功制备了4株BoHp单克隆抗体,分别命名为1B3、6D6、6D3和6B7.Western blot结果显示,制备的4株BoHp单克隆抗体1B3、6D6、6D3和6B7能识别牛血浆中天然BoHp的α链.进一步抗体亚型鉴定结果表明,1B3、6D6、6D3和6B7抗体亚型均为IgG1,轻链型为kappa链.利用改良过碘酸钠标记法,对纯化的BoHp单克隆抗体1B3、6D6、6D3和6B7成功进行了HRP标记.BoHpα链单克隆抗体的制备及其HRP标记为BoHp特异性诊断方法的建立奠定了基础.