秀丽隐杆线虫rict-1/daf-2Pdhs-3::dhs-3::gfp双突变体构建

摘要

线虫存在与同哺乳动物同源的调控脂肪沉积及相关代谢疾病的因子和代谢通路,是一种研究脂肪沉积的模式生物.线虫中已经构建出许多脂肪沉积改变的突变体,而且目前已有利用绿色荧光指示脂肪沉积的突变体Pdhs-3::dhs-3::g f p,Pdhs-3::dhs-3::g f p在脂滴表面激发绿色荧光,因此可以直接观测线虫脂肪沉积的变化.rict-1编码线虫中与哺乳动物Rictor同源蛋白.daf-2编码线虫胰岛素受体络氨酸激酶.为了研究脂肪沉积与相关调控因子及代谢通路的关系,文章构建了rict-1/daf-2&Pdhs-3::dhs-3::gf p双突变体.首先采用Pdhs-3::dhs-3::gf p的雄虫与rict-1/daf-2的雌雄同体杂交得到子一代,继而筛选出绿色荧光纯合的子三代.最后通过酶切、基因测序等方法获得性状稳定的、能够稳定遗传的突变体.