MassCLEAVE作为CFTR基因突变体检测方法的研究

摘要

研究基于开发检测囊状纤维跨膜电导调节因子(CFTR)基因突变体高度敏感的新型特异性MassCLEAVE法.此法利用聚合酶链反应(PCR)扩增法和体外转录法使在4列互相无影响的裂解反应中制造的碱基特异性酶解产物基于自身核苷酸序列在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)中可产生相关特异性质谱峰值.比对产出峰值与参考峰值,利用4组裂解反应结果来确定并补充每个碱基变化的精确位置和类型.CFTR基因突变体检测所需的扩增子均可成功设计,并成功测试了含有48个CFTR基因突变体的样品,所有的基因突变体均可通过其鉴别信号明确被检出.MassCLEAVE法可用于快速检测多种已知CFTR基因突变体,并同时可鉴定出新的未知基因突变体和区分已知基因突变体的非致病性等多态现象.