柿单宁酶PsnTanA异源表达及酶学特性表征

摘要

单宁酶在食品、饲料和制药等领域具有巨大应用潜力。本研究通过对柿树单宁酶基因PsnTanA进行密码子优化,使得该基因的GC含量由60.2%调整到57.1%,CAI值由0.62调整到0.76,优化前后基因序列的一致性为78.3%。单宁酶PsnTanA经大肠杆菌BL21表达后,重组酶PsnTanA在40℃和pH 7.0下表现出最大活性,比酶活力为1.53 U/mg,表观分子量约为39 kD。多种金属离子抑制了重组酶PsnTanA的活力,并随着金属离子浓度的增大而增强,其中Cu;和Fe;表现出的抑制效应最为明显,部分有机试剂也表现出类似的现象。以没食子酸正丙酯为底物时,单宁酶PsnTanA的Km值和Vmax值分别为1.43 mmol/L和3.28 mmol/(L·min)。除此之外,研究发现单宁酶PsnTanA能够有效降解高粱、茶和绿豆单宁等底物。本研究不仅丰富了现有单宁酶资源,也为进一步为单宁酶在食品和饲料中的应用提供了必要的理论支撑。