Livin基因沉默对人喉癌Hep2细胞凋亡和增殖及化疗敏感性的影响

摘要

目的探讨Livin基因沉默对人喉鳞癌Hep2细胞凋亡、增殖及化疗敏感性的影响。方法根据Livin基因合成3对siRNA(siRNA1~3),以Lipofectamine 2000为转染试剂转染人喉鳞癌Hep2细胞,分为Hep2-con组(control-siRNA)、Hep2-L组(Lipofectamine2000)、Hep2-s1组(Livin-siRNA1)、Hep2-s2组(Livin-siRNA2)、Hep2-s3组(Livin-siRNA3)及Hep2组(PBS),采用Western blot检测各组Hep2细胞中Livin蛋白表达水平;Hep2-s1~s3组仅保留干扰效果最好的Hep2-s1组进行后续研究,采用噻唑蓝(MTT)法检测4组细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;将0.00、0.01、0.10、1.00及10.00 mg/L顺铂(DDP)作用于上述4组细胞后采用平板克隆形成实验、MTT法及流式细胞仪检测各组细胞对化疗敏感性的影响。结果与Hep2组比较,Hep2-s1组人喉鳞癌Hep2细胞增殖受到抑制、细胞凋亡率升高(P<0.05);与Hep2组比较,加入不同浓度DDP后Hep2-s1组Hep2细胞克隆形成率降低、集落抑制率升高、细胞存活率下降(P<0.05);与Hep2组比较,5 mg/L顺铂作用后Hep2-s1组Hep2细胞凋亡率和生长抑制率随时间延长增加,各检测点细胞凋亡率和生长抑制率升高(P<0.05)。结论 RNAi沉默Hep2细胞中Livin表达,可抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡及增加肿瘤细胞对顺铂化疗的敏感性。