hUMSCs向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch1和神经元素3的表达

摘要

目的:探讨人间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞诱导分化过程中Notch信号通路受体Notch1与神经元素3(Ngn3)变化。方法:分离培养并鉴定hUMSCs,采用分阶段联合诱导法(前10 d用含EGF低糖培养基诱导,后11 d用含激活素A和尼克酰胺高糖培养基诱导)诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化,设单独培养的hUMSCs作为对照;观察诱导分化前后细胞的形态变化,免疫细胞化学法检测诱导后细胞Ngn3、胰高血糖素(Glucagon)表达鉴定胰岛前体细胞,电镜下观察诱导后胰岛前体细胞改变;采用免疫细胞化学法、real-time PCR法及Western blot法检测诱导第7天、第14天及第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达;Western blot法检测诱导并加入γ分泌酶抑制剂(DAPT)后第21天时细胞中Notch1及Ngn3的表达水平。结果:诱导后Glucagon免疫组化染色呈阳性,出现胰岛前体细胞集落,电镜下可见胞体内有分泌颗粒;real-time PCR和Western blot结果显示,Notch1水平在诱导后第7天时最高,Ngn3水平至第14天时达到峰值;添加Notch信号通路抑制剂后Ngn3表达水平升高。结论:Notch信号通路可能通过激活Notch1受体与下游基因Ngn3共同调控体外诱导hUMSCs向胰岛前体细胞分化过程。