质谱分析联合网络药理学探析固本方对三阴性乳腺癌的作用机制

摘要

【目的】基于质谱分析和网络药理学探析固本方(党参、黄芪、灵芝等组成)对三阴性乳腺癌的作用机制,并进行实验验证。【方法】采用液质联用质谱分析固本方冻干粉化学成分。运用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、PubChem数据库获得固本方化学成分的SMILE结构,SwissTargetPrediction数据库预测其潜在作用靶点,检索TTD、Drugbank、OMIM、京都基因与基因组百科全书(KEGG)、PharmGkb、GeneCard、DisGeNET等数据库得到疾病靶点,运用Venny 2.1数据库得到固本方与三阴性乳腺癌交集的靶点,利用STRING数据库构建交集靶点的蛋白-蛋白互作(PPI)网络,应用DAVID工具进行基因本体论(GO)和KEGG富集分析。以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,分别用固本方、卡培他滨干预,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞增殖能力的抑制率,Western Blot法检测细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)蛋白表达水平。【结果】质谱分析结果显示,固本方主要化学成分为党参炔苷、灵芝酸B、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、柴胡皂苷A、芒柄花苷、澳洲茄碱、贝母素甲、毛蕊异黄酮、熊果酸、齐墩果酸、芒柄花素、紫杉醇。PIK3CA、PIK3R1、Akt1等为固本方治疗三阴性乳腺癌的潜在核心靶点,PI3K-Akt信号通路富集结果显著且靶点数最多。细胞实验结果显示,固本方呈时间和浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖,固本方下调MDA-MB-231细胞Akt、p-Akt、p-PI3K蛋白的表达。【结论】通过质谱分析获得固本方主要化学成分12种,PIK3CA、PIK3R1、Akt1等为固本方治疗三阴性乳腺癌的潜在核心靶点,PI3K/Akt信号通路发挥主要作用。固本方可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并调控其PI3K/Akt通路。