源自重组菌BL21-pET28a-cdE降氰酶的基本性质研究

摘要

在前期研究工作的基础上,对含降氰酶基因重组菌BL21-pET28a-cdE开展遗传稳定性以及降氰酶基本特性的研究,比较分析原代菌与传代重组菌的菌落形态特点、质粒稳定性、蛋白表达、酶活水平,并对镍柱纯化获得的95%纯度的降氰酶进行了最适温度、最适pH、保藏稳定性的实验考察。结果显示,重组菌在无抗生素压力下传至100代时的质粒稳定性可保持在73%,菌落形态、蛋白表达、酶活水平等指标与原代的相一致。降氰酶的最适氰降解反应条件为30℃、pH 7.0。添加2%甘油可在4℃条件下稳定保藏降氰酶50 h,其相对酶活力为102.2%,而添加2%乙醇可使降氰酶在-20℃条件下稳定保藏1个月,其相对酶活力仍可达到80.9%。研究结果表明,重组菌BL21-pET28a-cdE具有良好的遗传稳定性,为未来大规模发酵制备降氰酶处理氰污染提供了可能。