重组黏质沙雷菌脂肪酶的可溶性表达及其性质研究

摘要

cqvip:目的提高重组黏质沙雷菌ECU1010脂肪酶（GST-lipase）可溶性表达量,研究其相关理化性质。方法PCR扩增lipase基因,与表达载体pGEX-4T-1连接后转入E.coli BL21（DE3）,优化培养提高可溶性表达量,表达产物用GST亲和层析柱纯化。研究温度、pH等对酶活性的影响,重组酶的底物特异性以及对（±）-MPGM的手性拆分。结果优化后可溶性酶的活性可达8 612.3 U/L,纯化9.8倍后比活性为3.3 U/mg。重组脂肪酶的最适反应温度为30℃,最适pH为9.0。温度低于30℃、pH 6.0-6.8的条件下比较稳定。Ca^2＋,Fe^2＋等金属离子和一些非离子表面活性剂能提高酶的活性。硝基苯月桂酸酯（C12）是其最适底物。以（±）-MPGM为底物,4 h后转化率达到47.3%,ee值为89.7%。结论优化后可溶性脂肪酶的活性大大提高,研究了重组脂肪酶的相关性质,为地尔硫的工业化生产奠定了基础。