VASN基因敲除小鼠的基因型的鉴定方法研究

摘要

目的:确定提高VASN基因敲除小鼠基因型检出率的方法.方法:根据VASN基因外显子设计2对gRNA,将Cas9和gRNA共注射入受精卵生产出F0代小鼠,将F0代小鼠进行近交繁殖产生F1代,分别用3种方法鉴定F1代小鼠基因型,比较3种方法的检出率.方法一:DNA提取试剂盒A+DNA高保真聚合酶a+PCR扩增条件1,鉴定16只小鼠;方法二:DNA提取试剂盒A+DNA高保真聚合酶b+PCR扩增条件2,鉴定14只小鼠;方法三:DNA提取试剂盒B+DNA高保真聚合酶b+PCR扩增条件3,鉴定9只小鼠.结果:Cas9和gRNA共注射入319枚受精卵,分5批移植,其中3批受孕成功,胚胎移植率为60.00％,共获得16只F0代小鼠,经过自交繁殖共获得39只F1代小鼠.分3批分别采用3种方法进行鉴定,方法一的基因型检出率为12.50％;方法二的基因型检出率为64.29％;方法三的基因型检出率为100.00％,且与测序结果吻合,电泳图无杂带.结论:DNA提取试剂盒B+DNA高保真聚合酶b+PCR扩增条件3的基因型鉴定检出率最高.