血管紧张素Ⅱ2型受体基因敲除小鼠的构建、繁育和基因型鉴定

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9技术构建血管紧张素Ⅱ2型受体(AngiotensinⅡtype 2 receptors,Agtr2)基因敲除(Agtr2-/-)小鼠,分析Agtr2-/-小鼠的繁育和基因型.方法 与江苏集萃药康公司联合设计执行CRISPR/Cas9技术,获得Agtr2-/-F0代小鼠,通过聚合酶链式反应(PCR)对鼠尾基因型进行鉴定.F1代Agtr2-/-小鼠由F0代Agtr2--小鼠性成熟后与同窝野生型小鼠交配而得.PCR鉴定结果的可靠性则通过Western blot从蛋白水平上加以验证.结果 利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Agtr2-/-小鼠并对所获小鼠进行繁育和基因型鉴定,得到了Agtr2+/+、Agtr+/-、Agtr2-/-3种基因型稳定的Agtr2基因小鼠.Western blot检测结果证实Agtr2-/-小鼠心脏、脾脏、胸腺、肝脏及肾脏组织中几乎不表达Agtr2蛋白.结论 成功构建了Agtr2-/-小鼠模型,并通过可靠的鉴定方法和合适的繁育手段得到纯合Agtr2-/-小鼠.