CSE基因敲除小鼠的基因型鉴定方法

摘要

目的 介绍一种胱硫醚-γ-裂解酶(Cystathionine-γ-lyase,CSE)基因敲除小鼠基因型的鉴定方法.方法 提取3只野生型(Wild type,WT)小鼠(CSE+/+)和21只杂合子小鼠(CSE+/-)繁殖的子代小鼠的鼠尾基因组DNA,以其为模板,聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增后凝胶电泳;然后分别提取3只WT小鼠和6只随机选择的CSE基因敲除小鼠(CSE-/-)肠道组织和骨髓来源的巨噬细胞(Bone marrow-derived macrophage,BMDM)蛋白,并用免疫印迹法(Western blot)检测其中CSE蛋白的表达.结果 凝胶电泳结果显示:只在167 bp处有表达的是WT鼠或CSE+/+小鼠;在167 bp处、309 bp处均有表达的是CSE+/-小鼠;只在309 bp处有表达的是CSE-/-小鼠.Western blot检测结果表明,与野生鼠相比,CSE-/-小鼠肠道组织和BMDM中CSE蛋白表达显著性降低(P<0.01),与凝胶电泳实验结果一致.结论 采用PCR结合凝胶电泳的方法鉴定CSE基因敲除小鼠的基因型是一种较为准确的鉴定方法,此方法可以为使用该动物的实验研究节约经济成本和时间成本.