BECN1影响三阴性乳腺癌对多西他赛敏感性的实验研究

摘要

目的:探讨沉默BECN1后,三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞对多西他赛敏感性变化.方法:将MDA-MB-231细胞分为干扰组、阴性对照组(NC组)和空白组,NC组与干扰组分别使用含有阴性对照慢病毒、BECN1干扰慢病毒的完全培养基培养进行转染处理,空白组不做处理.实时荧光定量PCR检测各组细胞BECN1 mRNA的表达.蛋白免疫印迹反应(Western blot,WB)检测各组细胞BECN1蛋白的表达.CCK-8法检测多西他赛处理各组细胞后的半抑制浓度(IC50).流式细胞术检测多西他赛干预48 h后各组细胞的凋亡率.结果:荧光显微镜下可观察干扰组、NC组干扰慢病毒感染效率均达95％以上.实时荧光定量PCR结果显示,与空白组及NC组比较,干扰组BECN1 mRNA的表达显著降低(P＜0.05).WB实验结果显示,与空白组及NC组比较,干扰组BECN1蛋白的表达显著降低(P＜0.05).CCK-8结果显示,多西他赛干预48h后,与空白组及NC组比较,干扰组IC50显著减小(P＜0.05),多西他赛呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖,在同一浓度下,干扰组细胞增殖抑制率高于空白组及NC组(P＜0.05).流式细胞术结果显示,0.1μg/mL多西他赛干预48 h后,与空白组及NC组比较,干扰组细胞凋亡率明显减小(P＜0.05).结论:通过RNA干扰沉默BECN1基因能提高多西他赛对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用,但减弱了多西他赛诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡效果,提示BECN1有可能成为治疗三阴性乳腺癌细胞化疗耐药的一个重要靶点.