miR-541-3p靶向SENP1调控皮肤黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭机制的研究

摘要

目的:探讨微小RNA-541-3p(miR-541-3p)对皮肤黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测皮肤黑色素瘤组织中miR-541-3p、SENP1的表达水平;以人皮肤黑色素瘤细胞A375为研究对象,分别将miR-NC、miR-541-3p mimics、si-NC、si-SENP1、miR-541-3pmimics与pcDNA、miR-541-3p mimics与pcDNA-SENP1转染至A375细胞;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-541-3p过表达对野生型和突变型SENP1荧光素酶活性的影响;Western blotting检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达量.结果:与正常皮肤组织比较,皮肤黑色素瘤组织中miR-541-3p的表达量显著降低(P＜0.05),SENP1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);与miR-NC组比较,miR-541-3p组A375细胞活力显著降低(P＜0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P＜0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P＜0.05),p21蛋白水平显著升高(P＜0.05);与si-NC组比较,si-SENP1组A375细胞活力显著降低(P＜0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P＜0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P＜0.05),p21蛋白水平显著升高(P＜0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-541-3p能够抑制SENP1的3'-UTR区荧光素酶活性;与miR-541-3p+pcDNA组比较,miR-541-3p+pcDNA-SENP1组细胞活力显著升高(P＜0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P＜0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著升高(P＜0.05),p21蛋白水平显著降低(P＜0.05).结论:miR-541-3p过表达可靶向抑制SENP1表达从而减弱皮肤黑色素瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力.