雌二醇诱导子宫内膜癌细胞产生的VEGF、bFGF对PI3K/AKT通路的影响

摘要

目的:探讨雌二醇(E2)诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞生成的血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的主要基因蛋白的影响.方法:(1)以不同浓度E2作用于Ishikawa细胞30 min后,采用蛋白印迹法检测p-AKT蛋白水平.(2)实验设3组:①对照组;②E2组;③抑制剂+E2组(包括BIBF1 120+ E2组、Ponatinib+ E2组和LY294002+ E2组),用荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测子宫内膜癌细胞内VEGF、bFGF、PI3K、AKT基因及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Transwell检测细胞迁移能力.结果:(1)不同浓度(分别为0.01,0.1,1,10,100 μmol/L)的E2作用30 min后Ishikawa细胞中p-AKT蛋白的表达水平均高于对照组(P＜0.05),且E2浓度为1 μmol/L时其表达水平最高;(2)E2组中VEGF、bFGF、PI3K、AKT mRNA及VEGF、bFGF、p-PI3K、p-AKT蛋白活化水平均高于对照组(均P ＜0.05).BIBF1120+ E2组、Ponatinib+ E2组、LY294002+ E2组细胞中PI3K、AKT基因及p-PI3K、p-AKT蛋白的表达均低于E2组(均P＜0.05);(3)E2组与对照组相比,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加(均P＜0.05),迁移穿过微孔的细胞增加(均P＜0.05).LY294002+E2组、BIBF1120+E2组、Ponatinib+ E2组分别与E2组相比,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少(均P＜0.05),迁移穿过微孔的细胞减少(均P＜0.05).结论:E2通过非基因转录效应产生VEGF、bFGF可以激活PI3K/AKT通路,促进子宫内膜癌的发生和转移.