Cadherin-11过表达载体的构建及其对大鼠牙髓细胞生物学特性的影响

摘要

目的:构建表达钙黏蛋白-11(Cadherin-11)的重组腺病毒载体,并观察其对大鼠牙髓细胞生物学特性的影响.方法:PCR扩增Cadherin-11,在引物中引入NheⅠ和HindⅢ酶切位点,构建pDC316 mCMV-EGFP Cadherin-11重组腺病毒穿梭载体.用含目的基因的重组质粒转染293T细胞,获得含目的基因的高滴度腺病毒.原代培养大鼠牙髓细胞,并用pDC316 mCMV-EGFP Cadherin-11重组腺病毒进行转染.采用免疫细胞化学法和RT-PCR法分别检测目的基因Cadherin-11的表达.结果:以pDC316-mCMV-EGFP-Cadherin-11转染大鼠牙髓细胞后,Cadherin-11 mRNA和蛋白均为阳性表达(均P＜0.05),且感染复数(MOI)为50时病毒转染效率最高.携带Cadherin 11目的基因的大鼠牙髓细胞生长速度明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜o.05).结论:构建重组腺病毒载体pDC316 mCMV-EGFP-Cadherin-11可高效转染大鼠牙髓细胞,并稳定表达Cad-herin-11基因;过表达Cadherin-11对大鼠牙髓细胞生长具有一定的促进作用.