PNP-TK融合自杀基因系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究

摘要

目的分析PNP-TK融合自杀基因系统对HepG2肝癌细胞的杀伤作用及其对肝癌细胞的杀伤机制。方法利用重组PCR定点诱变法制备PNP-TK融合基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.0中,构建融合基因表达载体pcDNA3.0/PNP-TK,经酶切、PCR及测序鉴定重组体,G418筛选获得稳定转染了pcDNA3.0/PNP-TK的抗性细胞克隆。RT-PCR和Western Blotting检测PNP-TK基因在HepG2细胞中的表达。台盼兰排斥法测定细胞生长曲线,MTT法检测细胞对相应前药的敏感性及分别在一种和两种前药作用下所导致的旁观者效应。结果融合基因片段PNP-TK正确插入了pcDNA3.0载体中,pcDNA3.0/PNP-TK在肝癌细胞株HepG2中实现了表达。细胞抗性克隆对相应的前药十分敏感。在两种前药的联合作用下,pcDNA3.0/PNP-TK对肝癌细胞产生了良好的旁观者效应。结论具有双自杀基因功能的表达载体pcDNA3.0/PNP-TK对肝癌细胞HepG2有着良好的杀伤作用,有望将其应用于肝癌体内治疗。