受精抗原-1基因的克隆和GST融合表达

摘要

目的：克隆和原核表达小鼠受精抗原-1(FA-1)基因。方法：自行设计引物，用RT-PCR从小鼠睾丸组织总RNA扩增FA-1基因的编码序列。将扩增产物克隆至GST融合表达载体pGEX-2T。以IPTG诱导GST融合FA-1的表达。结果：凝胶电泳显示PCR扩增产物的分子量与预期的508bp-致。重组质粒经BamHI／EcoR I双酶切后产生一个约500bp的片段。对重组质粒的序列测定表明，插入片段的序列与发表的FA-1基因编码序列相符。在IPTG的诱导下，BL21重组菌高效表达出一个分子量与43kDa相近的产物(预期44.2kDa)。该产物可通过GST融合蛋白纯化试剂盒得到纯化。结论：小鼠FA-1编码序列已被成功地克隆至GST融合表达载体pGEX-2T。