弓形虫ZS株P22基因片段的克隆、表达与融合蛋白的纯化

摘要

目的克隆弓形虫ZS株表面抗原P22编码基因,构建原核重组表达质粒pThioHisA,B,C/P22,并在大肠杆菌(Top10)中进行表达及纯化融合蛋白.方法PCR扩增及限制性内切酶Pst Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切496 bp的弓形虫表面抗原P22编码基因目的片段,胶回收纯化,插入表达质粒载体pThioHisA,B,C多克隆位点,构建重组体pThioHisA,B,C/P22,并转化大肠杆菌(E.coli)Top10,筛选阳性克隆,以限制性酶切分析及测序鉴定后,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导,在E.coliTop10中表达,用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物并纯化.结果PCR扩增出约496 bp的P22编码基因目的片段,与预期片段大小相符;所构建的pThioHisA,B,C/P22重组体阳性克隆经双酶切与测序鉴定,与预期结果一致SDS-PAGE与免疫印迹显示,表达融合蛋白产物约35.4 kD.结论成功构建弓形虫ZS株表面抗原P22编码基因pThioHisA,B,C/P22表达质粒,诱导表达弓形虫表面抗原P22蛋白,并纯化该融合蛋白.