高效液相色谱法测定环二酰胺酶催化水解马来酰亚胺动力学参数

摘要

采用高效液相色谱法(HPLC)分析并测定了环二酰胺酶水解马来酰亚胺反应的动力学参数.以Symmetry(R)C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm)为色谱柱,甲醇:10 mmol/L K2 HPO4～KH2PO4缓冲液(pH 6.5)体积比5:95为流动相,检测波长为255 nm,流速1.0 mL/min等色谱条件,马来酰亚胺与其水解产物马来酰胺酸得到较理想的分离效果.按照Lineveaver-Burk的双倒数作图法求得环二酰胺酶催化马来酰亚胺水解的动力学参数为Km=39.09mmol/L,Vmax=154.02 μmol/(min·mg),Vmax/Km=3.94,kcat=28 750.4 min-1,kcat/Km=735.5 mmol/(L·min).30 min环二酰胺酶催化底物马来酰亚胺转化率达到95%.该方法快速、准确、重复性好.