乙酰木聚糖酯酶基因的克隆、表达及酶学性质研究

摘要

乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖的O-乙酰基,消除木聚糖酶水解木聚糖时该基团产生的空间阻碍作用.以宇佐美曲霉(A spergillus usamii)E001菌株的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增了乙酰木聚糖酯酶成熟肽的编码基因(Auaxe),并构建了重组表达质粒pPIC9KM-A uaxe,SalⅠ线性化后电转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,经G418抗性筛选及甲醇诱导表达72 h,获得了重组乙酰木聚糖酯酶(reAuAxe),其酶活性为35.6 U/mL.发酵液经纯化获得电泳纯reAuAxe,其表观相对分子质量约为3.4×104,比酶活性为390.5 U/mg.纯化后reAuAxe的最适反应温度为50℃,在45℃及以下稳定;其最适反应pH为6.0,在pH 4.5～7.0范围内稳定;所测的多数金属离子及EDTA对其酶活性影响不大.