TaqMan-MGB探针荧光定量聚合酶链式反应法检测酸奶制品中动物双歧杆菌BB-12

摘要

目的建立一种TaqMan-小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针荧光定量聚合酶链式反应法检测酸奶制品中动物双歧杆菌BB-12的分析方法。方法设计动物双歧杆菌BB-12的16SrRNA序列的MGB探针,利用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术,构建目标序列的过表达载体,提取质粒进行标准曲线的绘制,最后进行市售酸奶样品检测,定量酸奶中BB-12菌株的数量。结果所有载体标准品均产生显著的荧光增幅,循环阈值(cycle threshold, Ct)介于16~20之间;而以其他酸奶制品添加菌及大肠杆菌样品DNA为模板则无荧光扩增信号。在检测灵敏度方面,BB-12载体可被稳定检出的质量浓度低至0.0000584 ng/μL, Ct值平均数为28.73,即检测灵敏度低至为0.05 pg。绘制的标准曲线线性良好,扩增效率E为0.39,判定系数R^(2)=0.9999。市售酸奶样品检测特异性好、灵敏度高、定量结果准确。结论本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测法可实现在酸奶中对BB-12菌种的检测及定量。