对虾血细胞中一氧化氮合成酶鉴定与分析方法研究

摘要

通过硝基蓝四唑(NBT)还原法和血细胞形态法两种一氧化氮合成酶的鉴定方法,以日本对虾(Penaeus japonicus)作为研究对象,对日本对虾血细胞中的一氧化氮合成酶进行初步鉴定,并优化硝基蓝四唑(NBT)还原法测定对虾血细胞中一氧化氮合成酶的实验条件.结果显示,当L-精氨酸浓度为2.5 mmol/L,脂多糖(LPS)质量浓度为100 μg/mL,Ca2+浓度为2.5 mmol/L时,NBT法测定一氧化氮合成酶活力的结果最佳.同时,还建立了两种针对一氧化氮合成酶活力的分析方法-L-瓜氨酸分析法和亚硝酸盐分析法,并对其测定条件进行了优化.结果表明,对虾血细胞在4 ℃下与L-精氨酸和LPS孵育8 h后测定的结果最为理想.利用这4种方法能够有效地鉴定和分析对虾血细胞中的一氧化氮合成酶,这为深入了解一氧化氮合成酶在对虾先天性免疫中的地位及其在对虾抗病力中的作用提供了理论依据.