以重复序列为靶位点的鳜鱼多位点基因打靶载体的构建

摘要

以鳜鱼(Siniperca chuatsi)为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料.先构建含TK和Neo基因的通用打靶载体pCTKNeo.采用LA Taq高保真酶扩增获得左、右同源重组引导臂HRDS1、HRDS2,经T质粒克隆后,分别插入到pCTKNeo载体Neo基因的上下游,构建成鳜鱼专用的多位点打靶载体pCTKNeo-HRDS1/2.同样将干扰素基因hIFN插入到pCTKNeo-HRDS1/2载体的Neo基因与HDRS2之间.每次克隆均经PCR、酶切和测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向,最终构建成多位点基因打靶载体pCTKNeo-HRDS1/2-hIFN.目前的基因打靶技术存在打靶效率低、安全性等问题,以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术将部分解决这些问题.