半滑舌鳎髓样分化因子的克隆和表达分析

摘要

髓样分化因子(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)是Toll/IL-1R家族成员,是TLR信号通路中的一个关键接头分子,在天然免疫系统中具有重要作用.迄今,在重要海水养殖鱼类半滑舌鳎中尚未见有关MyD88的研究报道.本研究克隆了半滑舌鳎(Gynoglossus semilaevis)MyD88基因,并对其表达模式进行了初步研究.半滑舌鳎MyD88基因的cDNA全长为1 612 bp,其中包括132 bp的5'非翻译区(UTR),590 bp的3'UTR和编码285个氨基酸残基的858 bp的开放阅读框(ORF).MyD88蛋白在N端具有死亡结构域(Death Domain,DD),C端具有TIR结构域(Toll/IL-1 Receptor Domain,TIR),MyD88基因组全长为2 923 bp,包括5个外显子和4个内含子.系统进化树分析表明,半滑舌鳎MyD88和牙鲆聚在一起,具有最近的亲缘关系.实时定量PCR结果显示,MyD88基因几乎在所有组织中都有表达,在血液、脾脏、头肾、肝脏等免疫组织和精巢、卵巢生殖腺中具有较高水平的表达.利用LPS(lipopolysaccharide)、PGN(peptidoglycan)和poly I:C作为免疫刺激源感染半滑舌鳎外周血淋巴细胞的结果显示,三者均可诱导MyD88基因的表达上调.鳗弧菌(Vibrio angaillarum)感染实验表明,注射鳗弧菌96h后MyD88基因在脾脏中表达量升高了近180倍、在肝脏中的表达量升高了60多倍;在注射鳗弧菌48 h后,头肾中表达量升高了近5倍.上述实验暗示,MyD88基因在半滑舌鳎天然免疫防御系统中具有重要作用.