半滑舌鳎促黄体激素基因克隆和表达分析及其血清浓度测定

摘要

促黄体激素由脑垂体前叶细胞分泌,通过血液循环到达性腺及其他组织,主要调控性腺成熟及排精/排卵.利用RACE技术首次克隆了半滑舌鳎脑垂体中LH基因cDNA 全长序列.该基因全长670bp,开放阅读框为477bp,编码158个氨基酸.与其它脊椎动物的LH 成熟肽氨基酸序列同源性比较表明:半滑舌鳎LH与鲽形目和鲈形目同源性高58-68％.另外，半滑舌鳎LH含有12个保守的半肌氨酸残基和1个N一糖基化位点(19-21NQT)。实时荧光定量组织表达分析表明，LH mRNA在脑、垂体、卵巢等组织中表达，垂体中表达量最丰富，其他组织尤以脑、性腺表达量较高，推测半滑舌鳎LH可能具有广泛的垂体外生理功能;实时荧光定量PCR方法对繁殖周期雌性半滑舌鳎LH表达水平进行测定，结果表明，LH mRNA在Ⅱ-Ⅵ各繁殖周期的脑、垂体、卵巢3种组织都有表达，但表达水平有差异，在Ⅳ、Ⅴ期表达量最丰富，说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。利用125∣标记的放射免疫测定(RIA)技术检测繁殖周期半滑舌鳎血清LH浓度，结果表明LH在V期含量最丰富，亦说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。