双须骨舌鱼抗缪勒氏管激素基因amh的克隆、组织表达分析和原核表达

摘要

为探究双须骨舌鱼抗缪勒氏管激素基因amh的作用和表达模式,本研究通过RACE技术克隆了双须骨舌鱼amh基因全长cDNA序列,发现存在amh1、amh2两个亚型(GenBank登录号KU378662、KU378663).序列分析结果显示,双须骨舌鱼amh1基因的cDNA全长2277bp,编码623个氨基酸,amh2基因cDNA全长2181 bp,编码355个氨基酸.同源性分析显示,amh基因保守性较低,双须骨舌鱼与同科的美丽硬仆骨舌鱼相似度最高,为85.64％,与不同科鱼类的相似度均低于42％.系统进化分析显示,该基因与骨舌鱼目聚为一支,与鲱形目、鲤形目等较低等的硬骨鱼类亲缘关系较近,与双须骨舌鱼进化地位相符.用荧光定量PCR检测的结果显示,amh基因在双须骨舌鱼不同组织中均有表达,其中amh1亚型在精巢中表达量最高,且明显高于卵巢和其他组织;amh2亚型也在精巢中表达量最高,且明显高于其他组织,但远远低于amh1在精巢中的表达.构建了原核表达载体pCold I-amh1和pCold I-amh2并在大肠杆菌中成功诱导出大小分别为68和48 ku的融合蛋白,为进一步研究amh在双须骨舌鱼体内的生物功能奠定了基础.