哲罗鲑胰岛素样生长因子-Ⅰ的原核表达及活性鉴定

摘要

为进一步了解哲罗鲑IGF-Ⅰ,实验采用逆转录聚合酶链武反应(RT-PCR)方法,从哲罗鲑肝脏的总RNA中扩增出胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的cDNA开放阅读框(open reading frame,ORF)序列.利用原核表达载体pS构建重组表达质粒(IGF-Ⅰ/pS),并将其转化到宿主大肠杆菌Rosetta后经IPTG诱导获得重组哲罗鲑IGF-I蛋白.经SDS-PAGE电泳检测,在35～50ku有条带与预期相符,且重组蛋白以包涵体的形式存在.包涵体经变性/复性实验后,获得纯化的IGF-Ⅰ融合蛋白.ELISA鉴定结果显示,目的蛋白能特异性识别抗鱼类IGF-Ⅰ抗体,表明获得了具有免疫活性的哲罗鲑IGF-Ⅰ蛋白.细胞增殖实验(MTT法)结果显示,重组IGF-Ⅰ蛋白对大麻哈鱼胚胎细胞(CHSE-214)、鲤上皮细胞(EPC)及虹鳟性腺细胞(RTG-2)均有显著促增殖作用,表明获得的重组IGF-Ⅰ蛋白具有细胞水平的生物活性.本研究为深入了解IGF-Ⅰ在哲罗鲑生长发育中的调控机制及绿色高效促生长制剂的研发奠定基础.