重组膜联蛋白Ⅱ表达载体构建及其促纤溶特性研究

摘要

膜联蛋白Ⅱ(annexinⅡ)是纤溶酶原和组织型纤溶原激活物的共同受体.本研究旨在探讨annexinⅡ引起急性白血病及其它肿瘤患者原发性纤溶亢进的分子病理机制,阐明annexinⅡ促纤溶活性,为探讨annexinⅡ在凝血障碍中的作用提供理想的载体模型.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增annexinⅡ基因片段,经纯化及连接,用脂质体转染入HL-60细胞中表达;用多光子激发的共聚焦显微镜观察其表达产物的胞内分布及结构特性;用流式细胞术及Western印迹对转染的细胞表达进行定量及定性分析,并揭示其对纤溶酶活性的影响.结果显示:成功地构建了pZeoSV2(+)/ANNⅡ真核表达质粒,经转染HL-60细胞后,可表达annexinⅡ活性蛋白,荧光检测显示其表达蛋白分布在转染细胞的膜表面;FCM检测annexinⅡ在转染后48小时呈高表达;annexinⅡ可显著增加纤溶酶的活性,且瞬时表达及稳定表达具有相同的结果.annexinⅡ反义寡核苷酸与单抗均可显著抑制annexinⅡ的促纤溶活性(P＜0.01).结论:annexinⅡ在纤维蛋白溶解中具有重要作用,用本研究构建的annexinⅡ重组载体可为今后的相关研究提供实验基础,并为防治出血及血栓性疾病研究有可能提供新的思路和开辟新的途径.