胎儿间充质干细胞cDNA扣除文库的构建

摘要

为了获得胎儿和成人间充质干细胞 （mesenchymalstemcells,MSC）的差异表达基因 ,尤其是在胎儿MSC中特异表达的基因 ,应用抑制扣除杂交技术构建了胎儿和成人MSCcDNA扣除文库。首先 ,分别从胎儿和成人MSC中提取总RNA ,按照SMARTPCR方法依次合成单链和双链cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,胎儿MSCcDNA分别与两种不同的接头连接 ,再与成人MSCcDNA经过两次扣除杂交及两轮抑制性PCR扩增后 ,将产物与T载体连接构建成cDNA扣除文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增。结果 :文库扩增后共获得 890个克隆 ,对所获得的克隆进行PCR扩增鉴定 ,获得 76 8个阳性克隆 ,阳性率为 86 .3%。插入片段大小分布在 0 .2 - 1kb ,平均为 4 0 0 - 6 0 0bp。结论 :抑制扣除杂交技术是一种简便、有效的筛选差异表达基因的方法。胎儿MSCcDNA扣除文库的构建为进一步筛选、克隆胎儿MSC中特异性表达的功能相关基因奠定了基础。