DMBA、垂体移植诱发性乳腺瘤内172Arg—Leu突变型p53的特性及其与基因重排和扩增关系的研究

摘要

p53最早发现于SV40转化的细胞系，后来几乎在不同类型的细胞内均检测到这种蛋白质。野生型P58是一种有效的肿瘤抑制因子，但突变体p53可与ras－肿瘤原因协同转化体外的腺代细胞，而且在肿瘤发生时常伴随着p53基因的突变。乳腺瘤内，p53基因的突变率为40％，并可见到某些肿瘤基因参与癌症的形成过程，暗示p53基因结构和功能和改变可能与这些基因的重排和扩增有关。本实验选择4种不同年龄的172Arg-Leu突变型p53转基因小鼠为受试动物，将同系动物的垂体腺植入小鼠的肾脏后，再以致癌剂DMBA处理，以使动物乳腺内的p53基因表达和诱导小鼠乳腺癌形成。从乳腺癌小鼠分别摘取乳腺组织，提取DNA和RNA，以H－ras、PCNA、CylinD1、p53基因的DNA片段作为特异性核酸探针，进行Southerm Blotting和Northern Blotting分析，以检测在突变体P53表达的情况下，PCNA、H-ras、CyinDl等基因在体内的变化规律，实验发现，在4组不同的受试动物中，其乳腺癌细胞的PCNA和H－ras两种基因发生了基因重排，特征是其DNA标本中分别出现了一条很强的额外杂交带，但对照动物乳腺该类基因以及被检测的肿瘤基因中均未发现结构上有任何改变。这表明，仅管内源性p53和突变体p53的高效表达抑制或延缓肿瘤的发生，但不能从根本上阻止PCNA和H－ras基因的重排。肿瘤基因的拷贝数及其表达的定量测定结果证明，虽然CyclinDl和H-ras基因在所有检测的小鼠癌组织和正常乳腺细胞均有扩增，但扩增的量极低，很难构为成肿瘤形成的主要因素。其他基因，如：MDM、PCNA等，也未见到明显改变。由于p53基因在转化细胞和肿瘤组织内的存在方式与基因扩增密切相关，乳腺癌小鼠体内的突变型p53的高效表达可能对基因扩增起到了抑制作用。最终，在一定程度上推迟了转基因小鼠的肿瘤形成过程。此外，致癌剂DMBA可诱发小鼠乳腺癌形成。其主要机制是使H－ras基因的第61位密码子发生突变。本实验证明，DMBA虽使垂体移植转基因小鼠发生了乳腺癌，但其作用点并非常见的第61位密码子，而是使H－ras基因发生重排，并使PCNA基因结构也发生同样变化。这种现象不仅是DMBA致癌方式上的新发现，而且表明该致癌剂的这种生物学效应可能与突变体p53的功能有关。