乳腺特异性表达172^（HIS）突变型p53转基因鼠的建立

摘要

ｐ５３基因突变几乎存在于所有人类肿瘤中，尤其与严重危害妇女健康的恶性肿瘤──乳腺癌关系密切。研究表明：野生型ｐ５３基因是抑癌基因，而突变型ｐ５３基因则是癌基因──呈显性负调控突变型。本研究首次构建了这种类型的１７２ＨＩＳ突变型ｐ５３基因的转基因鼠，用以研究ｐ５３基因突变与乳腺癌发生的关系。用重组ＰＣＲ法把小鼠ｐ５３基因的第１７２个密码子ＣＧＣ突变成ＣＡＣ（由编码精氨酸突变为编码组氨酸），得到１７２ＨＩＳ突变型ｐ５３基固。将其插入到大鼠乳清酸性蛋白（ＷＡＰ）启动子与ＳＶ４０ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列之间。获得置于载体ｐＢＬ１１９（Ｆｉｇ．１）上的表达结构ＷＡＰ－１７２ＨＩＳｍｔｐ５３－ＳＶ４０。经过ＢｓｓＨＩＩ酶切，纯化该表达结构部分。通过显微注射，将其分别导入ＦＶＢ和Ｃ５７ＢＬ品系小鼠受精卵中，获得３２只Ｆ０代鼠。经ＰＣＲ鉴定，其中９只为转基因阳性鼠（Ｆｉｇ．２）。对其进行的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析（Ｆｉｇ．３）证实了ＰＣＲ的鉴定，并得出了每只鼠中整合的转基因拷贝数（Ｔａｂｌｅ１）。当这９只鼠哺乳第二天时，取乳腺制备ＲＮＡ，进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析，其中５只的乳腺中有转基因表达，其中３只呈较高水平表达（Ｆｉｇ．?