突变型p53基因反义表达载体及其制备方法

摘要

本发明公开了一种突变型p53基因反义表达载体及其制备方法，属于基因工程技术。本发明载体上连接有突变的p53外显子8基因序列，并能够转录出与此突变点特异性结合的互补反义RNA，从而阻断突变p53信号的表达；其制备方法是采用免疫组化筛选突变型p53细胞系、PCR-SSCP法及基因测序确定突变的p53外显子和基因序列，把含有突变位点的p53外显子8序列插入pGEM3zf(+/-)质粒载体的多克隆位点处，构建pGEM3zf(+/-)p53exon8’重组载体。这样制备的反义RNA被直接导入研究细胞内，因为是直接导入反义RNA本身，所导入的RNA分子量小，较易进入细胞内，操作简单；由于体外转录系统能合成较多量的产物，可随时重复操作，满足需要的RNA量。