木质素合成酶CCR基因的PCR条件优化

摘要

以欧美杨107号为材料建立了木质素合成酶CCR基因的PCR反应优化体系,用于CCR基因片段的克隆,以CTAB法提取杨树叶片的总DNA,分别测试了模板DNA用量、dNTP浓度、DNA聚合酶量、引物浓度和退火温度对反应结果的影响.通过各单因子的组合比较,建立了PCR优化体系:20μL的PCR反应体系中含有2.0 μL 10×Taq酶配套缓冲液,2.5 U Taq酶,1 μL模板DNA,3.0 pmol正向及反向引物,0.75 mmol/L dNTP混合液;退火温度为50℃.