Dickkopf-3过表达对结直肠癌LoVo细胞生物学行为的影响

摘要

目的 采用基因过表达技术,过表达CRC细胞中DKK-3 (Dickkopf-3)基因,运用迁移实验、侵袭实验等方法检测CRC细胞DKK-3基因过表达前后侵袭和转移能力的变化.方法 使用Lipofectamine 2000试剂将针对目的基因DKK-3的过表达质粒pEGFP-N1-DKK-3-GFP转染入LoVo细胞.RT-PCR和WestemBlotting分别用于检测质粒转染前后结直肠癌LoVo细胞DKK-3基因和蛋白表达水平的变化.通过WST-8,检测DKK-3过表达对结直肠癌LoVo细胞增殖能力的影响;通过FACSCalibur流式细胞仪和碘化丙啶(PI)染色,检测DKK-3过表达对结直肠癌LoVo细胞周期的影响;通过transwell小室,检测DKK-3过表达对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响.最后,通过Western Blotting检测相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2、cytochrome c (Cyt-c)和β-catenin表达水平的变化.结果 pEGFP-N 1-DKK-3-GFP介导的DKK-3过表达明显抑制了pEGFPN1-DKK-3组LoVo细胞的增殖(P＜0.05),而未处理LoVo组和pEGFP-N1组细胞之间增殖速度无统计学差异(P＞0.05).pEGFP-N1-DKK-3组的穿膜细胞数明显少于未处理LoVo组(和pEGFP-N1组(P＜0.05),结果显示DKK-3过表达可能抑制了LoVo细胞的侵袭能力.pEGFP-N 1-DKK-3组的穿膜细胞数明显少于未处理LoVo组和pEGFP-N1组(P＜0.05),结果显示DKK-3过表达可能抑制了LoVo细胞的迁移能力.同未处理LoVo组和pEGFP-N1组相比,pEGFP-N1-DKK-3组细胞G0/G1期细胞所占比例差异具有统计学意义(P＜0.05).DKK-3过表达同时也诱导了结直肠癌LoVo细胞的凋亡,表现为染色质凝聚和核碎片、Bax和Cyt-c蛋白表达上调、survivin和Bcl-2蛋白表达下调以及caspase-3和caspase-9的活化.此外,DKK-3过表达还减少了细胞溶质中β-catenin累积.结论 DKK-3过表达可能通过线粒体途径诱导CRC细胞的凋亡.另外,DKK-3可能参与了CRC的Wnt/β-catenin信号转导通路.