ag85a-卡介苗重组疫苗的构建、免疫原性及抗结核作用的初步研究

摘要

目的 构建结核分枝杆菌ag85a-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗.方法 通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85A的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗.通过ELISA法检测其免疫小鼠血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数.通过观察ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果.结果 PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了ag85a基因pYUB295重组质粒,Ag85A蛋白在卡介苗中分泌表达.重组卡介苗免疫原性试验表明:ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠有Ag85A特异性抗体产生, 45天时达到最高水平.脾淋巴细胞增殖试验表明刺激指数均达2.0以上,ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数与对照组无明显区别.预防试验表明:ag85a-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率.结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变、脏器培养、抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验表明:各组间无显著差别.结论 正确构建了ag85a-卡介苗重组疫苗,ag85a-卡介苗重组疫苗与卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用基本相同.