人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系PC-9/ER的建立及其特性

摘要

目的：构建厄洛替尼耐药人肺腺癌细胞模型PC-9/ER,观察单用人表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼或联合胰岛素样生长因子受体1（insulinlike growth factor receptor 1,IGFIR）酪氨酸激酶抑制剂苦鬼臼毒（picropodophyllotoxin,PPP）作用于该细胞后,该细胞对厄洛替尼耐药性的影响,并探讨耐药相关机制。方法：选择人肺腺癌细胞株PC-9,采用逐步递增厄洛替尼浓度的方法体外诱导构建耐药株PC-9/ER,CCK-8法检测耐药指数;细胞计数法绘制PC-9和PC-9/ER的生长曲线,并计算出两细胞系的倍增时间;流式细胞术检测两细胞系的细胞周期;Western Blot法检测p-EGFR及p-IGFIR的表达水平,并进一步检测厄洛替尼及PPP单独或联合作用于PC-9/ER后,各组Akt,ERK,p-Akt及p-ERK的表达水平。结果：PC-9/ER细胞株的耐药指数是72.3。细胞生长曲线显示,PC-9/ER细胞生长较亲代细胞慢,PC-9与PC-9/ER细胞的倍增时间分别为32.9及36.9 h（P=0.003）。与PC-9相比,PC-9/ER细胞的G1期细胞增多（P=0.001）,而S期细胞则明显下降（P：0.015）。Western Blot结果表明,PC-9/ER细胞中p-IGF1R表达比亲代细胞明显增多（P=0.016）,而p-EGFR无明显变化（P=0.152）。在亲代及耐药细胞系,厄洛替尼联合PPP组均较其他组更能显著的抑制细胞增殖（P〈0.05）;且Western Blot法表明联合用药组EGFR下游磷酸化的Akt、ERK的表达水平明显减少。结论：成功构建了人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞株PC-9/ER,IGF1R通路可能与肺腺癌EGFR-TKI获得性耐药有关。