微小RNA-199a靶向调控沉默信息调节因子1对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响

摘要

目的探讨微小RNA-199a(miR-199a)对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响及对沉默信息调节因子1(SIRT1)的调控作用。方法构建脑梗死大鼠实验模型,将60只大鼠随机分为假手术组、脑梗死组、miR-199a抑制组、miR-199a阴性对照组、miR-199a抑制+SIRT1抑制组,每组12只。通过神经行为学评估判断大鼠神经功能变化,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织神经元病理变化,采用流式细胞术检测脑皮质神经元凋亡情况,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组脑组织中miR-199a、SIRT1 mRNA表达水平,并通过蛋白质印迹法(Western blot)检测各组脑组织SIRT1、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量。采用双荧光素酶报告基因系统验证miR-199a和SIRT1的靶向调控关系。结果与假手术组相比,脑梗死组大鼠脑组织出现变性、神经元坏死情况,神经元凋亡率、Cleaved caspase-3蛋白表达量、神经学评分和miR-199a表达量升高,SIRT1 mRNA和SIRT1蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-199a可与野生型SIRT13′-UTR特异性结合,两者具有靶向调控关系。结论抑制miR-199a表达可靶向上调SIRT1表达水平,缓解脑梗死大鼠神经元凋亡,改善神经功能。