长链非编码RNA脑源性神经营养因子反义RNA靶向微小RNA-495-3p调控脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应

摘要

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)脑源性神经营养因子反义RNA(BDNF-AS)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法该研究起止时间为2018年12月至2019年12月。用1 mg/L的LPS处理大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞作为LPS组;正常培养的细胞作为Con组。将BDNF-AS小分子干扰RNA(si-BDNF-AS)及其阴性对照(si-NC)、微小RNA(miR)-495-3p及其阴性对照(miR-NC)转染至NR8383细胞中再用1 mg/L的LPS处理,记为LPS+siBDNF-AS组、LPS+si-NC组、LPS+miR-495-3p组、LPS+miR-NC组;将si-BDNF-AS分别与anti-miR-NC、anti-miR-495-3p共转染至NR8383细胞中再用1 mg/L的LPS处理,记为LPS+si-BDNF-AS+anti-miR-NC组、LPS+si-BDNF-AS+anti-miR-495-3p组。实时荧光定量PCR检测lncRNA BDNF-AS和miR-495-3p的表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达;荧光素酶报告实验检测BDNF-AS对miR-495-3p的靶向关系。结果LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞中BDNF-AS高表达[(1.00±0.06)比(3.41±0.31)],miR-495-3p低表达[(1.02±0.07)比(0.47±0.04)],IL-1β[(22.14±2.25)ng/L比(513.20±41.22)ng/L]、TNF-α[(184.33±18.65)ng/L比(1125.65±110.36)ng/L]水平升高,细胞凋亡率[(8.11±0.81)%比(36.22±3.21)%]升高,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。抑制BDNF-AS表达或过表达miR-495-3p后,IL-1β[(526.14±46.87)ng/L比(132.41±12.58)ng/L、(536.14±51.02)ng/L比(175.98±18.41)ng/L]、TNF-α[(1203.33±185.22)ng/L比(354.26±21.58)ng/L、(1248.65±115.28)ng/L比(628.47±53.69)ng/L]水平降低,细胞凋亡率[(38.14±3.71)%比(12.03±1.25)%、(36.98±3.61)%比(14.87±1.42)%]降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P<0.05)。BDNF-AS靶向调控miR-495-3p,抑制miR-495-3p表达逆转了抑制lncRNA BDNF-AS表达对LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应的抑制作用。结论抑制lncRNA BDNF-AS表达可能通过上调miR-495-3p抑制LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应。