脑信号蛋白3A及其受体神经菌毛素-1在慢性肝性脑病大鼠模型中的表达及意义

摘要

cqvip:目的探究肝性脑病(HE)大鼠大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中脑信号蛋白3A(Sema3A)及受体神经菌毛素(NRP-1)的表达变化及可能的意义。方法SD大鼠40只随机分为4组:对照组、HE 1 d、15 d、30 d组,每组各10只。胆管结扎并辅以乙酸铵灌胃的方法制备慢性HE(C型)大鼠模型,进行行为学、神经病学改变的检测;ELISA检测大鼠血清中血氨及其他生化指标;HE染色观察大鼠肝脏和脑组织形态学变化;Real-time PCR检测各脑区Sema3A、NRP-1 mRNA的表达;免疫组化、Western Blot分别检测大脑皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A及NRP-1蛋白的表达变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果4组间神经反射等级、血氨、HE等级均有统计学差异(F值分别为76.39、417.07、71.56,P值均<0.001),与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组神经反射得分、血氨、HE等级均明显升高(P值均<0.05)。4组间TBA、Alb、TBil、AST、ALT、ALP比较差异均有统计学意义(F值分别为1022.61、171.56、685.18、421.01、675.20、2405.04,P值均<0.001),与对照组相比,HE 1 d、15 d、30 d组Alb水平明显降低(P<0.05),其余指标明显升高(P值均<0.05)。病理学结果显示,与对照组相比,造模后大鼠肝脏出现不同程度的变性坏死,炎细胞浸润,大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区体等部位观察到神经细胞不同程度的肿胀、破裂、排列紊乱等病理征象。4组间Sema3A、NRP-1 mRNA比较差异均有统计学意义(Sema3A mRNA:F值分别为273.83、158.84、103.59、128.90,P值均<0.001;mRNA:F值分别为88.78、173.02、156.44、289.09,P值均<0.001);与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A、NRP-1 mRNA相对表达量均较高(P值均<0.05)。建模后Sema3A、NRP-1蛋白表达水平上调,免疫组化显示,HE组大鼠前额叶皮层和海马CA1、CA3、DG区Sema3A及NRP-1呈阳性染色。Western Blot显示,4组间大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区Sema3A、NRP-1蛋白表达差异均有统计学意义(Sema3A:F值分别为835.14、774.16、282.60、856.29,P值均<0.001;NRP-1:F值分别为876.59、472.48、402.36、207.47,P值均<0.001);与对照组相比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区内Sema3A、NRP-1蛋白表达均明显升高(P值均<0.05)。结论Sema3/NRP-1在慢性HE大鼠脑组织内表达上调,参与HE神经损伤的病理生理过程。