慢病毒转染稳定表达GFP融合自噬蛋白LC3大鼠H9c2心肌细胞系的建立

摘要

目的 建立稳定表达绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)的大鼠心肌细胞H9c2细胞系.方法 构建MSCV-GFP-LC3表达栽体,应用转染技术将该质粒导入H9c2细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系.载体细胞与心肌细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与共聚焦显微镜及Western blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察应激时细胞发生自噬的情况.结果 成功获得一株转染并经G418反复筛选的H9c2细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光表达率在95％以上,Western blot结果证实了GFP-LC3融合蛋白的表达.激光共聚焦显微镜证明给予自噬诱导剂Rapamycin可诱导自噬的发生.结论 用MSCV-GFP-LC3转染的H9c2细胞经G418筛选,可成功建立GFP-LC3稳定表达系,从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型.